Bedankt voor het bezoeken van Nature.com. De browserversie die u gebruikt, heeft beperkte CSS -ondersteuning. Voor de beste resultaten raden we aan om een nieuwere browser te gebruiken (of de compatibiliteitsmodus uit te schakelen in Internet Explorer). In de tussentijd zullen we, om voortdurende ondersteuning te garanderen, de site weergeven zonder stijlen en JavaScript.
De oprichting van diermodellen van Modic Change (MC) is een belangrijke basis voor het bestuderen van MC. Vierenvijftig Nieuw-Zeelandse witte konijnen werden verdeeld in Sham-Operation Group, Muscle Implantation Group (ME-groep) en nucleus pulposus implantatiegroep (NPE-groep). In de NPE -groep werd de tussenwervelschijf blootgesteld door anterolaterale lumbale chirurgische benadering en een naald werd gebruikt om het L5 -wervellichaam nabij de eindplaat te doorboren. NP werd geëxtraheerd uit de L1/2 intervertebrale schijf door een spuit en erin geïnjecteerd. Een gat boren in het subchondrale bot. De chirurgische procedures en boormethoden in de spierimplantatiegroep en de Sham-Operation Group waren dezelfde als die in de NP-implantatiegroep. In de ME-groep werd een stuk spier in het gat geplaatst, terwijl in de groep met schijnoperatie niets in het gat werd geplaatst. Na de operatie werden MRI -scanning en moleculaire biologische testen uitgevoerd. Het signaal in de NPE-groep veranderde, maar er was geen duidelijke signaalverandering in de Sham-Operation-groep en de ME-groep. Histologische observatie toonde aan dat abnormale weefselproliferatie werd waargenomen op de implantatieplaats, en de expressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ was verhoogd in de NPE-groep. Implantatie van NP in het subchondrale bot kan een diermodel van MC vormen.
Modische veranderingen (MC) zijn laesies van de wervel -eindplaten en aangrenzend beenmerg zichtbaar op magnetische resonantie beeldvorming (MRI). Ze zijn vrij gebruikelijk bij personen met bijbehorende symptomen1. Veel studies hebben het belang van MC benadrukt vanwege de associatie met lage rugpijn (LBP) 2,3. De Roos et al.4 en Modic et al.5 beschreven onafhankelijk voor het eerst drie verschillende soorten subchondraal signaalafwijkingen in het wervelbeenmerg. Modische type I-veranderingen zijn hypointense op T1-gewogen (T1W) -sequenties en hyperintense op T2-gewogen (T2W) sequenties. Deze laesie onthult splitsen eindplaten en aangrenzend vasculair granulatieweefsel in het beenmerg. Modische type II -veranderingen tonen een hoog signaal op zowel T1W- als T2W -sequenties. In dit type laesie kan eindplaatvernietiging worden gevonden, evenals histologische vetvervanging van het aangrenzende beenmerg. Modische type III -veranderingen tonen een laag signaal in T1W- en T2W -sequenties. Sclerotische laesies die overeenkomen met de eindplaten zijn waargenomen6. MC wordt beschouwd als een pathologische ziekte van de wervelkolom en wordt nauw geassocieerd met vele degeneratieve ziekten van de wervelkolom7,8,9.
Gezien de beschikbare gegevens hebben verschillende onderzoeken gedetailleerde inzichten opgeleverd in de etiologie en pathologische mechanismen van MC. Albert et al. suggereerde dat MC kan worden veroorzaakt door schijf herniation8. Hu et al. toegeschreven MC aan ernstige schijfdegeneratie10. Kroc stelde het concept voor van 'interne schijven', waarin staat dat repetitieve schijftrauma kan leiden tot microtears in de eindplaat. Na gespleten vorming kan eindplaatvernietiging door de nucleus pulposus (NP) een auto -immuunrespons veroorzaken, wat verder leidt tot de ontwikkeling van MC11. Ma et al. Deelde een soortgelijk beeld en meldde dat door NP geïnduceerde auto-immuniteit een sleutelrol speelt in de pathogenese van MC12.
Immuunsysteemcellen, met name CD4+ T -helperlymfocyten, spelen een cruciale rol in de pathogenese van auto -immuniteit13. De onlangs ontdekte Th17-subset produceert de pro-inflammatoire cytokine IL-17, bevordert chemokine-expressie en stimuleert T-cellen in beschadigde organen om IFN-γ14 te produceren. Th2 -cellen spelen ook een unieke rol in de pathogenese van immuunresponsen. Expressie van IL-4 als een representatieve TH2-cel kan leiden tot ernstige immunopathologische gevolgen15.
Hoewel veel klinische studies zijn uitgevoerd op MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, is er nog steeds een gebrek aan geschikte experimentele modellen voor dieren die het MC -proces kunnen nabootsen dat vaak bij mensen voorkomt en kan zijn en kan zijn gebruikt om de etiologie of nieuwe behandelingen zoals gerichte therapie te onderzoeken. Tot op heden zijn gemeld dat slechts enkele diermodellen van MC de onderliggende pathologische mechanismen bestuderen.
Gebaseerd op de auto -immuuntheorie voorgesteld door Albert en MA, heeft deze studie een eenvoudig en reproduceerbaar Rabbit MC -model opgezet door autotransplanteren NP in de buurt van de geboorde wervel -eindplaat. Andere doelstellingen zijn het waarnemen van de histologische kenmerken van de diermodellen en de specifieke mechanismen van NP te evalueren bij de ontwikkeling van MC. Daartoe gebruiken we technieken zoals moleculaire biologie, MRI en histologische studies om de progressie van MC te bestuderen.
Twee konijnen stierven aan bloedingen tijdens de operatie en vier konijnen stierven tijdens anesthesie tijdens MRI. De resterende 48 konijnen overleefden en vertoonden geen gedrags- of neurologische tekenen na een operatie.
MRI laat zien dat de signaalintensiteit van het ingebedde weefsel in verschillende gaten anders is. De signaalintensiteit van het L5 -wervellichaam in de NPE -groep veranderde geleidelijk na 12, 16 en 20 weken na het inbrengen (T1W -sequentie vertoonde een laag signaal en T2W -sequentie vertoonde gemengd signaal plus laag signaal) (Fig. 1C), terwijl de MRI -verschijningen van de andere twee groepen ingebedde delen bleven relatief stabiel gedurende dezelfde periode (Fig. 1A, B).
(A) Representatieve opeenvolgende MRI's van de lumbale wervelkolom van het konijn op 3 tijdstippen. Er werden geen signaalafwijkingen gevonden in de beelden van de groep met schijnbewerking. (B) De signaalkarakteristieken van het wervellichaam in de ME-groep zijn vergelijkbaar met die in de Sham-Operation-groep, en er wordt in de tijd geen significante signaalverandering waargenomen op de insluitingsplaats. (C) In de NPE -groep is het lage signaal duidelijk zichtbaar in de T1W -sequentie en het gemengde signaal en het lage signaal zijn duidelijk zichtbaar in de T2W -sequentie. Van de periode van 12 weken tot de periode van 20 weken, afnemen de sporadische hoge signalen rond de lage signalen in de T2W-sequentie af.
Duidelijke bothyperplasie is te zien op de implantatieplaats van het wervellichaam in de NPE -groep, en de bothyperplasie treedt sneller voor van 12 tot 20 weken (Fig. 2C) vergeleken met de NPE -groep, er wordt geen significante verandering waargenomen in de gemodelleerde vertebraal lichamen; Sham Group en ME -groep (Fig. 2C) 2a, B).
(A) Het oppervlak van het wervellichaam aan het geïmplanteerde gedeelte is erg glad, het gat geneest goed en er is geen hyperplasie in het wervellichaam. (B) De vorm van de geïmplanteerde site in de ME -groep is vergelijkbaar met die in de Sham Operation Group, en er is geen duidelijke verandering in het uiterlijk van de geïmplanteerde site in de loop van de tijd. (C) Bothyperplasie trad op op de geïmplanteerde plaats in de NPE -groep. De bothyperplasie nam snel toe en strekte zich zelfs uit door de tussenwervelschijf naar het contralaterale wervellichaam.
Histologische analyse biedt meer gedetailleerde informatie over botvorming. Figuur 3 toont de foto's van de postoperatieve secties gekleurd met H&E. In de Sham-Operation-groep waren de chondrocyten goed gerangschikt en werd geen celproliferatie gedetecteerd (Fig. 3A). De situatie in de ME-groep was vergelijkbaar met die in de Sham-Operation-groep (Fig. 3B). In de NPE-groep werd echter een groot aantal chondrocyten en proliferatie van NP-achtige cellen waargenomen op de implantatieplaats (Fig. 3C);
(A) Trabeculae is te zien in de buurt van de eindplaat, de chondrocyten zijn netjes gerangschikt met uniforme celgrootte en vorm en geen proliferatie (40 keer). (B) De toestand van de implantatieplaats in de ME -groep is vergelijkbaar met die van de schijngroep. Trabeculae en chondrocyten zijn te zien, maar er is geen duidelijke proliferatie op de implantatieplaats (40 keer). (B) Het is te zien dat chondrocyten en NP-achtige cellen aanzienlijk prolifereren, en de vorm en grootte van chondrocyten zijn ongelijk (40 keer).
De expressie van interleukine 4 (IL-4) mRNA, interleukine 17 (IL-17) mRNA en interferon y (IFN-γ) mRNA werden waargenomen in zowel de NPE- als ME-groepen. Wanneer de expressieniveaus van doelgenen werden vergeleken, waren de genuitdrukkingen van IL-4, IL-17 en IFN-γ significant verhoogd in de NPE-groep in vergelijking met die van de ME-groep en de schijnoperatie (Fig. 4) (Fig. 4) (P <0,05). Vergeleken met de Sham Operation Group, namen de expressieniveaus van IL-4, IL-17 en IFN-γ in de ME-groep slechts enigszins toe en bereikten geen statistische verandering (p> 0,05).
De mRNA-expressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ in de NPE-groep vertoonde een significant hogere trend dan die in de Sham Operation Group en de ME-groep (P <0,05).
De expressieniveaus in de ME -groep vertoonden daarentegen geen significant verschil (p> 0,05).
Western-blot-analyse werd uitgevoerd met behulp van commercieel beschikbare antilichamen tegen IL-4 en IL-17 om het gewijzigde mRNA-expressiepatroon te bevestigen. Zoals getoond in figuren 5A, B, vergeleken met de ME-groep en de Sham Operation Group, waren de eiwitniveaus van IL-4 en IL-17 in de NPE-groep significant verhoogd (p <0,05). Vergeleken met de Sham Operation Group, slaagden de eiwitniveaus van IL-4 en IL-17 in de ME-groep ook niet in om statistisch significante veranderingen te bereiken (p> 0,05).
(A) De eiwitniveaus van IL-4 en IL-17 in de NPE-groep waren aanzienlijk hoger dan die in de ME-groep en placebogroep (p <0,05). (B) Western -blot histogram.
Vanwege het beperkte aantal menselijke monsters verkregen tijdens de operatie, zijn duidelijke en gedetailleerde studies naar de pathogenese van MC enigszins moeilijk. We probeerden een diermodel van MC op te zetten om de potentiële pathologische mechanismen ervan te bestuderen. Tegelijkertijd werden radiologische evaluatie, histologische evaluatie en moleculaire biologische evaluatie gebruikt om het verloop van MC te volgen geïnduceerd door NP autograft. Als gevolg hiervan resulteerde het NP-implantatiemodel in een geleidelijke verandering in signaalintensiteit van tijdstippen van 12 weken tot 20 weken (gemengd laag signaal in T1W-sequenties en een laag signaal in T2W-sequenties), wat weefselveranderingen en de histologische en moleculaire aangeeft Biologische evaluaties bevestigden de resultaten van het radiologische onderzoek.
De resultaten van dit experiment laten zien dat visuele en histologische veranderingen plaatsvonden op de plaats van inbreuk op het wervellichaam in de NPE -groep. Tegelijkertijd werden de expressie van IL-4-, IL-17- en IFN-γ-genen, evenals IL-4, IL-17 en IFN-γ waargenomen, wat aangeeft dat de inbreuk op autologe nucleus pulposusweefsel in het wervelkolom Lichaam kan een reeks signaal- en morfologische veranderingen veroorzaken. Het is gemakkelijk te ontdekken dat de signaalkarakteristieken van de wervellichamen van het diermodel (laag signaal in de T1W -sequentie, gemengd signaal en een laag signaal in de T2W -sequentie) zeer vergelijkbaar zijn met die van menselijke vertebrale cellen, en de MRI -kenmerken ook Bevestig de observaties van histologie en grove anatomie, dat wil zeggen dat de veranderingen in de wervellichaamcellen progressief zijn. Hoewel de ontstekingsreactie veroorzaakt door acuut trauma kort na de lekke band kan verschijnen, toonden MRI -resultaten aan dat geleidelijk toenemende signaalveranderingen 12 weken na de lekke band verschenen en tot 20 weken volhielden zonder tekenen van herstel of omkering van MRI -veranderingen. Deze resultaten suggereren dat autologe wervel -NP een betrouwbare methode is voor het vaststellen van progressieve MV bij konijnen.
Dit lekmodel vereist voldoende vaardigheid, tijd en chirurgische inspanningen. In voorlopige experimenten kunnen dissectie of overmatige stimulatie van de paravertebrale ligamenteuze structuren resulteren in de vorming van wervel osteofyten. Er moet voor worden gezorgd om de aangrenzende schijven niet te beschadigen of te irriteren. Aangezien de penetratiediepte moet worden geregeld om consistente en reproduceerbare resultaten te verkrijgen, hebben we handmatig een plug gemaakt door de schede van een 3 mm lange naald af te snijden. Het gebruik van deze plug zorgt voor een uniforme boordiepte in het wervellichaam. In voorlopige experimenten vonden drie orthopedische chirurgen die betrokken waren bij de operatie 16-gauge naalden gemakkelijker om mee te werken dan 18-gauge naalden of andere methoden. Om overmatig bloeden tijdens het boren te voorkomen, zal het een tijdje om de naald nog steeds een geschikter insertiegat te houden, wat suggereert dat een bepaalde mate van MC op deze manier kan worden gecontroleerd.
Hoewel veel studies gericht zijn op MC, is er weinig bekend over de etiologie en pathogenese van MC25,26,27. Op basis van onze eerdere studies hebben we geconstateerd dat auto -immuniteit een sleutelrol speelt bij het optreden en de ontwikkeling van MC12. Deze studie onderzocht de kwantitatieve expressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ, die de belangrijkste differentiatieroutes van CD4+ -cellen zijn na antigeenstimulatie. In onze studie, vergeleken met de negatieve groep, had de NPE-groep een hogere expressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ, en de eiwitniveaus van IL-4 en IL-17 waren ook hoger.
Klinisch wordt de IL-17-mRNA-expressie verhoogd in NP-cellen van patiënten met schijf hernia28. Verhoogde IL-4- en IFN-γ-expressieniveaus werden ook gevonden in een acuut niet-compressief hernia-model in vergelijking met gezonde controles29. IL-17 speelt een sleutelrol bij ontstekingen, weefselletsel bij auto-immuunziekten30 en verbetert de immuunrespons op IFN-y31. Verbeterde IL-17-gemedieerd weefselletsel is gerapporteerd bij MRL/LPR-muizen32 en auto-immuniteit-gevoelige muizen33. IL-4 kan de expressie van pro-inflammatoire cytokines (zoals IL-1β en TNFa) en macrofaagactivatie34 remmen. Er werd gemeld dat de mRNA-expressie van IL-4 anders was in de NPE-groep vergeleken met IL-17 en IFN-γ op hetzelfde tijdstip; De mRNA-expressie van IFN-γ in de NPE-groep was aanzienlijk hoger dan die in de andere groepen. Daarom kan de productie van IFN-γ een mediator zijn van de ontstekingsreactie die wordt veroorzaakt door NP-intercalatie. Studies hebben aangetoond dat IFN-γ wordt geproduceerd door meerdere celtypen, waaronder geactiveerde Type 1 helper T-cellen, natuurlijke killercellen en macrofagen35,36, en een belangrijke pro-inflammatoire cytokine is die immuunresponsen bevordert37.
Deze studie suggereert dat auto -immuunrespons kan worden betrokken bij het optreden en de ontwikkeling van MC. Luoma et al. vond dat de signaalkenmerken van MC en prominente NP vergelijkbaar zijn op MRI en beide vertonen een hoog signaal in T2W -sequentie38. Van sommige cytokines is bevestigd dat ze nauw verbonden zijn met het optreden van MC, zoals IL-139. Ma et al. suggereerde dat het opwaartse of neerwaartse uitsteeksel van NP een grote invloed kan hebben op het optreden en de ontwikkeling van MC12. Bobechko40 en Herzbein et al.41 meldden dat NP een immunotolerant weefsel is dat vanaf de geboorte niet de vasculaire circulatie kan betreden. NP -uitsteeksels introduceren vreemde lichamen in de bloedtoevoer, waardoor lokale auto -immuunreacties 42 worden bemiddeling42. Auto -immuunreacties kunnen een groot aantal immuunfactoren induceren, en wanneer deze factoren continu worden blootgesteld aan weefsels, kunnen ze veranderingen in signalering veroorzaken43. In deze studie zijn overexpressie van IL-4, IL-17 en IFN-γ typische immuunfactoren, wat de nauwe relatie tussen NP en MCS44 verder bewijst. Dit diermodel bootst de NP -doorbraak en toegang tot de eindplaat goed na. Dit proces onthulde verder de impact van auto -immuniteit op MC.
Zoals verwacht biedt dit diermodel ons een mogelijk platform om MC te bestuderen. Dit model heeft echter nog steeds enkele beperkingen: ten eerste, tijdens de dierobservatiefase, moeten sommige konijnen in de tussenstadium worden geëuthanaseerd voor histologische en moleculaire biologietests, dus sommige dieren "vallen buiten gebruik" in de loop van de tijd. Ten tweede, hoewel in dit onderzoek drie tijdstippen worden ingesteld, hebben we helaas slechts één type MC gemodelleerd (wijzigingen van het type I), dus het is niet voldoende om het ontwikkelingsproces van de menselijke ziekte weer te geven, en er moeten meer tijdstippen worden ingesteld op Beter alle signaalwijzigingen observeren. Ten derde kunnen de veranderingen in weefselstructuur inderdaad duidelijk worden aangetoond door histologische kleuring, maar sommige gespecialiseerde technieken kunnen de microstructurele veranderingen in dit model beter onthullen. Gepolariseerde lichtmicroscopie werd bijvoorbeeld gebruikt om de vorming van fibrocartilage in Rabbit Intervertebrale Discs45 te analyseren. De langetermijneffecten van NP op MC en eindplaat vereisen verder onderzoek.
Vierenvijftig mannelijke Nieuw-Zeelandse witte konijnen (gewicht van ongeveer 2,5-3 kg, 3-3,5 maanden) werden willekeurig verdeeld in Sham Operation Group, Muscle Implantation Group (ME-groep) en zenuwwortelimplantatiegroep (NPE-groep). Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door de ethische commissie van het Tianjin -ziekenhuis en de experimentele methoden werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de goedgekeurde richtlijnen.
Er zijn enkele verbeteringen aangebracht in de chirurgische techniek van S. Sobajima 46. Elk konijn werd in een laterale recumbency -positie geplaatst en het voorste oppervlak van vijf opeenvolgende lumbale tussenwervelschijven (IVD's) werd blootgesteld met behulp van een posterolaterale retroperitoneale benadering. Elk konijn kreeg algemene anesthesie (20% urethaan, 5 ml/kg via de oorader). Een longitudinale huidincisie werd gemaakt van de onderrand van de ribben naar de bekkenrand, 2 cm ventraal naar de paravertebrale spieren. De rechter anterolaterale wervelkolom van L1 tot L6 werd blootgesteld door scherpe en botte dissectie van het bovenliggende onderhuidse weefsel, retroperitoneale weefsel en spieren (Fig. 6A). Het schijfniveau werd bepaald met behulp van de bekkenrand als een anatomisch monument voor het L5-L6-schijfniveau. Gebruik een 16-gauge priknaald om een gat nabij de eindplaat van de L5-wervel te boren tot een diepte van 3 mm (Fig. 6b). Gebruik een spuit van 5 ml om de autologe kernpulposus in de L1-L2 intervertebrale schijf te aspireren (Fig. 6C). Verwijder de kernpulposus of spier volgens de vereisten van elke groep. Nadat het boorgat is verdiept, worden absorbeerbare hechtingen op de diepe fascia, oppervlakkige fascia en huid geplaatst, waardoor het periostale weefsel van het wervellichaam tijdens de operatie niet wordt beschadigd.
(A) De L5 - L6 -schijf wordt blootgesteld via een posterolaterale retroperitoneale benadering. (B) Gebruik een 16-gauge naald om een gat in de buurt van de L5-eindplaat te boren. (C) Autologe MF's worden geoogst.
Algemene anesthesie werd toegediend met 20% urethaan (5 ml/kg) toegediend via de oorader en lumbale wervelkolomröntgenfoto's werden herhaald op 12, 16 en 20 weken na de operatie.
Konijnen werden opgeofferd door intramusculaire injectie van ketamine (25,0 mg/kg) en intraveneus natrium pentobarbital (1,2 g/kg) op 12, 16 en 20 weken na de operatie. De hele wervelkolom werd verwijderd voor histologische analyse en reële analyse werd uitgevoerd. Kwantitatieve reverse transcriptie (RT-QPCR) en Western-blotting werden gebruikt om veranderingen in immuunfactoren te detecteren.
MRI -onderzoeken werden uitgevoerd bij konijnen met behulp van een 3.0 T klinische magneet (GE Medical Systems, Florence, SC) uitgerust met een orthogonale ledemaatspoelontvanger. Konijnen werden geanesthetiseerd met 20% urethaan (5 ml/kg) via de oorader en vervolgens in rugligging geplaatst in de magneet met het lumbale gebied gecentreerd op een cirkelvormige oppervlakte van een 5-inch diameter-oppervlaktespoel (GE Medical Systems). Coronale T2-gewogen lokalisatiebeelden (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) werden verkregen om de locatie van de lumbale schijf te definiëren van L3-L4 tot L5-L6. Sagittale vlak T2-gewogen plakjes werden verkregen met de volgende instellingen: snelle spin-echo-reeks met een herhalingstijd (TR) van 2200 ms en een echotijd (TE) van 70 ms, matrix; Visual Field van 260 en acht stimuli; De snijdikte was 2 mm, de opening was 0,2 mm.
Nadat de laatste foto was genomen en het laatste konijn was gedood, werden de schijn, spier ingebed en NP-schijven verwijderd voor histologisch onderzoek. Weefsels werden gefixeerd in 10% neutraal gebufferde formaline gedurende 1 week, ontkalkt met ethyleendiaminetetraazijnzuur en paraffine in paraffine. Weefselblokken werden ingebed in paraffine en gesneden in sagittale secties (5 urn dik) met behulp van een microtoom. Secties werden gekleurd met hematoxyline en eosine (H&E).
Na het verzamelen van de intervertebrale schijven van de konijnen in elke groep werd het totale RNA geëxtraheerd met behulp van een UNIQ-10-kolom (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) volgens de instructies van de fabrikant en een impromi reverse transcriptiesysteem (Promega Inc. , Madison, WI, VS). Reverse transcriptie werd uitgevoerd.
RT-qPCR werd uitgevoerd met behulp van een Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., VS) en Sybr Green Jump Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) volgens de instructies van de fabrikant. Het PCR -reactievolume was 20 ul en bevatte 1,5 ul verdund cDNA en 0,2 uM van elke primer. Primers werden ontworpen door oligoperfectontwerper (Invitrogen, Valencia, CA) en vervaardigd door Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (tabel 1). De volgende thermische cycli -omstandigheden werden gebruikt: initiële activeringsstap van polymerase bij 94 ° C gedurende 2 minuten, vervolgens 40 cycli van 15 s elk bij 94 ° C voor sjabloon denaturatie, gloeien gedurende 1 minuten bij 60 ° C, extensie en fluorescentie. Metingen werden gedurende 1 minuut uitgevoerd bij 72 ° C. Alle monsters werden drie keer versterkt en de gemiddelde waarde werd gebruikt voor RT-QPCR-analyse. Amplificatiegegevens werden geanalyseerd met behulp van FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, VS). IL-4, IL-17 en IFN-γ-genexpressie werden genormaliseerd op de endogene controle (ACTB). Relatieve expressieniveaus van doel-mRNA werden berekend met behulp van de 2-ΔAct-methode.
Totaal eiwit werd geëxtraheerd uit weefsels met behulp van een weefselhomogenizer in RIPA -lysebuffer (met een protease- en fosfataseremmercocktail) en vervolgens gecentrifugeerd bij 13.000 rpm gedurende 20 minuten bij 4 ° C om weefselafval te verwijderen. Vijftig microgram eiwit werd geladen per baan, gescheiden door 10% SDS-PAGE en vervolgens overgebracht naar een PVDF-membraan. Blokkering werd uitgevoerd in 5% magere droge melk in Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS) die 1 uur bij kamertemperatuur 0,1% tween 20 bevatte. Het membraan werd geïncubeerd met konijn anti-decorine primair antilichaam (verdund 1: 200; Boster, Wuhan, China) (verdund 1: 200; Bioss, Beijing, China) gedurende de nacht bij 4 ° C en reageerde op de tweede dagen; Met secundair antilichaam (geit anti-konijn immunoglobuline G bij 1: 40.000 verdunning) gecombineerd met mierikswortelperoxidase (Boster, Wuhan, China) gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Western-blotsignalen werden gedetecteerd door verhoogde chemiluminescentie op het chemiluminescente membraan na bestraling met röntgenfoto's. Voor densitometrische analyse werden blots gescand en gekwantificeerd met behulp van BandScan -software en de resultaten werden uitgedrukt als de verhouding van doelgenimmunoreactiviteit tot tubuline -immunoreactiviteit.
Statistische berekeningen werden uitgevoerd met behulp van het SPSS16.0 -softwarepakket (SPSS, VS). Gegevens verzameld tijdens de studie werden uitgedrukt als gemiddelde ± standaardafwijking (gemiddelde ± SD) en geanalyseerd met behulp van eenrichtingsherhaalde metingenanalyse van variantie (ANOVA) om verschillen tussen de twee groepen te bepalen. P <0,05 werd als statistisch significant beschouwd.
De oprichting van een diermodel van MC door autologe NP's te implanteren in het wervellichaam en macroanatomische observatie, MRI -analyse, histologische evaluatie en moleculaire biologische analyse kan dus een belangrijk hulpmiddel worden voor het beoordelen en begrijpen van de mechanismen van menselijke MC en het ontwikkelen van nieuwe therapeutische interventies.
Hoe dit artikel te citeren: Han, C. et al. Een diermodel van wijzigingen in het gebied werd vastgesteld door autologe kernpulposus te implanteren in het subchondrale bot van de lumbale wervelkolom. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. en Boos, N. Magnetische resonantie beeldvorming van de lumbale wervelkolom: prevalentie van schijf hernia en retentie, zenuwwortelcompressie, eindplaatafwijkingen en facetgewricht osteoartritis bij asymptomatische vrijwilligers . tarief. Radiology 209, 661–666, doi: 10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS en Leboeuf-EeT, K. Modic veranderingen en hun relatie tot klinische bevindingen. European Spine Journal: Officiële publicatie van de European Spine Society, de European Society of Spinal Formity en de European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Modische veranderingen in de lumbale wervel-eindplaten: prevalentie en associatie met lage rugpijn en ischias bij mannelijke werknemers van middelbare leeftijd. Spine 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.BR.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. en Dalinka, M. MRI van beenmergveranderingen in de buurt van de eindplaat in degeneratieve ziekte van de lumbale wervelkolom. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/Ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ en Carter, JR Degeneratieve schijfziekte: evaluatie van veranderingen in wervels met MRI. Radiology 166, 193–199, doi: 10.1148/Radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS en Carter, JR -beeldvorming van degeneratieve schijfziekte. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/Radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Voorspellers van Neovertebral Endplate (MODIC) signaalveranderingen in de algemene populatie. European Spine Journal: officiële publicatie van de European Spine Society, de European Society of Spinal Formity en de European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129–135, doi: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB en Mannisch, K. Modic verandert na lumbale schijf hernia. European Spine Journal: officiële publicatie van de European Spine Society, The European Society of Spinal Formity en de European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttuula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. en Kaapa, E. Modic Type I veranderingen kunnen snel progressieve vervormingsschijf degeneratie voorspellen: een 1-jarige prospectieve studie. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012).
HU, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ en Fan, SW Modic Wijzigingen: mogelijke oorzaken en bijdrage aan lumbale schijfdegeneratie. Medische hypothesen 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
KROK, HV interne schijfbeurt. Schijfverzakkingsproblemen gedurende 50 jaar. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Posttijd: dec-13-2024